敲除/敲低验证做在哪几条细胞系上,直接决定结论的说服力。推荐的选系流程是:疾病组织 → 依赖概率 → 表达水平 → 拷贝数状态,四步都用本站工具即可完成。
第一步:锁定疾病相关组织
在评估结果的逐细胞表中,先用"组织"下拉过滤到你的研究方向(如肝癌选 liver)。优先在自源组织里找高依赖细胞系,结论的临床相关性最强;如果该组织没有可用模型,再放宽到相邻 lineage。
第二步:用依赖概率排序
在「基因风险评估」(/GeneRisk)逐细胞表中取概率 > 0.8 的系。注意避开两类干扰:泛必需基因的"全员高概率",以及仅剩孤证的系(该系其它数据质量未确认时)。
第三步:确认靶基因真的表达
到「基因表达量评估」(/GeneExpr)查同一批系的 TPM:
- TPM > 10:蛋白层面大概率可检出,适合做 western / 功能实验;
- TPM < 0.5:基本不表达,即使依赖概率高也要怀疑数据噪声(或提示该基因以非表达依赖方式起效,如基因组不稳定)。
第四步:排除拷贝数干扰
在「基因拷贝数评估」(/GeneCn)确认目标位点没有大面积缺失:估计拷贝数 < 1 的系,CRISPR 切割后更容易因"残余单拷贝被切完"而呈现假阳性表型;拷贝数 ≥ 2 的系才能干净地解读"依赖 = 基因功能"。
实践组合示例
假设研究 GJB6 在皮肤癌中的作用:GeneCn 查得某皮肤细胞系拷贝数 ≈ 2(无缺失)→ GeneExpr 显示 TPM ≈ 40(高表达)→ GeneRisk 显示依赖概率 0.91 → 该系即为首选验证模型;再选一条"高表达但不依赖"的系做阴性对照,一组干净的敲除实验就设计完了。
提示:正式实验前请核对细胞系的 STR 认证与培养条件,DepMap 数据不代表可以直接照搬培养体系。